云序用户案例

案例：microRNA-182帮助糖尿病人免受视觉损伤

原文：microRNA-182 Mediates Sirt1-Induced Diabetic Corneal Nerve Regeneration     

期刊：Diabetes             影响因子：6.15  

糖尿病人常伴随糖尿病性角膜病的发生，主要是由神经损伤和角膜敏感性的降低引起。已有研究证明Sirt1在中枢神经系统中起到神经保护的作用，过表达Sirt1会促进角膜损伤修复的进程。然而，Sirt1的具体作用机制仍不清楚。本文主要针对Sirt1的作用机制进行研究，阐述了Sirt1/ miR-182在神经再生方面的作用。文章的主要研究思路如下图：

1.高通量筛选第一步：miRNA表达谱

结膜下注射使小鼠过表达Sirt1，然后检测miRNA表达谱，发现miR-182表达显著上调。已有文献报道miR-182是感觉神经元特异性的miRNA且参与视网膜病的发生。因此作者认为miR-182是Sirt1的下游靶点，并对它进行接下来的研究。

2.高通量筛选第二步：PCR芯片

在进一步的研究中，文章想要探究miR-182的靶基因。首先利用生物信息学软件预测发现：miR-182的很多靶基因都属于氧化应激和抗氧化压力通路相关基因。为了进一步得到这个信号通路中所有基因在糖尿病中的表达变化，文章用氧化应激和抗氧化PCR芯片检测相关基因的表达，发现NOX4在糖尿病小鼠中显著上调。暗示NOX4在糖尿病神经损伤方面发挥关键的调控作用。

3．必不可少的功能研究

在利用高通量技术筛选到Sirt1的靶基因miR-182后，功能实验证明miR-182能够促进神经细胞生长及损伤后的再生。当利用PCR芯片寻找到差异明显的miR-182靶基因－NOX4后，功能实验也验证NOX4会抑制miR-182诱导的神经再生的进程。

小结：高通量检测不仅可以研究疾病发生中的关键分子，还可以如本文一样，在已知蛋白生物功能的基础上筛选其下游靶基因进行分子机制研究。本文在已知Sirt1功能的基础上，通过miRNA高通量检测筛选出下游靶标miR-182, 然后利用PCR芯片快速筛选出miR-182靶基因－NOX4。文章思路清晰，环环相扣，对功能机制的研究具有借鉴意义。

云序技术优势：

• 标准化的一站式服务流程

  云序生物拥有丰富的PCR芯片服务经验和高性能的实时定量PCR平台，为客户提供可靠﹑快捷的一站式PCR芯片服务。云序和客户一起，根据研究内容确定所要研究的信号通路和样本种属后，下单订购所需的PCR芯片产品型号，客户只需向我们提交细胞﹑组织﹑体液或RNA样品，即可得到精确可靠的实验数据，避免不断进行实验摸索所耗费的时间和精力。实验结束后您亦可与云序的研究人员共同讨论分析您的实验结果，不断扩展您的实验思路。

  

PCR芯片优势

1.功能解析利器：快速建立表观转录组学、信号通路与细胞功能或疾病的关系；

2.聚焦于特定信号通路：一次性检测所有与特定信号通路或疾病状态相关的基因；

3.准确性：超高的准确性和可靠性，无需后续qPCR验证；

4.超高的灵敏度：起始RNA量可低至25ng；

5.严谨的质控：包含各种PCR对照，全程监控实验质量；

6.一站式服务：从样品到paper级别的数据，让实验数据唾手可得；

聚焦于信号通路，功能解析利器

PCR芯片聚焦于特定信号通路或疾病状态，收集了经典文献中所有与之相关的基因。研究人员无需查阅海量文献确定通路相关的基因，也无需耗费大量时间进行引物设计、PCR预实验以及后期数据分析，加快了实验进度，帮助客户节约了宝贵的时间和经费。此外，通路特异性PCR芯片还对通路相关的基因进行了详细的功能分类，如：信号激活基因，信号抑制基因，转录因子，信号通路靶基因等，能够帮助科研人员快速解析疾病的分子机制，或建立细胞表型与信号通路之间的关系。

定量金标准

1. 严谨的质控

PCR芯片上设置了各类严谨的PCR对照，可以用于：芯片数据的标准化、检测RNA的完整性、监控逆转录和PCR扩增的效率、检测样品中是否存在基因组DNA污染，保证了结果的可靠性和准确性。

2. 无与伦比的产品性能

PCR芯片采用基因定量“金标准”－实时定量PCR技术，通过配套的qPCR检测试剂盒进行基因表达分析，具有超高的灵敏度，杰出的重复性，卓越的准确性。正是由于PCR芯片的高可靠性和准确性，其数据结果无需后续的qPCR验证。从而帮助科研人员一次性完成了高通量筛选和基因表达验证，一举双得，极大的节省了科研时间和研究经费。

PCR芯片数据展示

常规的高通量检测方法会产生海量的数据，后续数据分析流程繁琐复杂，客户很难从中挖掘出真正有用的信息。而PCR芯片聚焦于与特定信号通路或疾病状况相关的关键基因，目标明确，避免了无效信息的干扰，能快速得到多种形式的Paper级别的图表，如：散点图，火山图，热图，柱状图等。

样本要求：

样品类型

全血、细胞、组织或RNA，其他样本类型可电话咨询。

样品量：

细胞：5×10^6

组织：>50mg

血液：>2ml（推荐用EDTA抗凝采血管，不可用肝素抗凝管）

RNA：>5μg（OD260/280：1.6-2.3；RNA无明显降解）

样品运输及保存

样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。

样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。