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案例:二甲双胍抑制子宫内膜癌的新机制，指出了DNA羟甲基化修饰在此过程中起的关键作用（本文DNA羟甲基化相关服务，由云序生物提供）。

原文：Metformin sensitizes endometrial cancer cells to chemotherapy through IDH1-induced Nrf2 expression via an epigenetic mechanism

期刊：Nature子刊《Oncogene》          影响因子：6.93      

子宫内膜癌（Endometrial Cancer, EC）是常见的妇科恶性肿瘤，部分患者对化疗药物（如紫杉醇、顺铂等）产生耐药性，导致治疗效果不佳，而二甲双胍（Metformin）在子宫内膜癌中表现出对化疗的增敏作用。二甲双胍是一种广泛使用的2型糖尿病药物，近年研究发现其具有抗肿瘤效应，可能通过代谢重编程或表观遗传调控增强癌细胞对化疗的敏感性，但具体机制尚不明确。异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）在多种癌症中过表达，其催化产物ɑ-酮戊二酸（ɑ-KG）可激活TET1（一种依赖ɑ-KG的双加氧酶），进而通过DNA羟甲基化调控基因表达。转录因子Nrf2是抗氧化反应的关键调节因子，高表达Nrf2与多种癌症的化疗耐药性相关，但其在二甲双胍增敏中的作用未被阐明。

上海交通大学附属第一人民医院张箴波团队发现，在子宫内膜癌组织中，异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）及其下游介质（ɑ-KG-TET1-Nrf2）的异常表达导致IDH1信号通路的激活，从而产生化疗耐药。斑点印迹和hMeDIP测定显示二甲双胍阻断IDH1-KG-TET1介导的Nrf2羟甲基化水平的增强，消除了化学抗性。此外，Nrf2可结合IDH1启动子区的抗氧化反应元件（ARE），促进IDH1转录，形成“IDH1-ɑ-KG-TET1-Nrf2”正反馈环路，进一步维持化疗耐药性。二甲双胍通过阻断这一环路增强化疗效果。该研究提出二甲双胍作为化疗增敏剂的潜在应用，尤其适用于IDH1/Nrf2高表达的耐药性子宫内膜癌患者。揭示了表观遗传调控（羟甲基化）在化疗耐药中的关键作用，为联合治疗策略（二甲双胍+化疗）提供理论依据。

hMeDIP-qPCR作图示例 

二甲双胍增强化疗敏感性的信号通路

云序技术优势：

云序生物全新推出MeDIP-qPCR服务，为客户提供：

1. 高特异性的甲基化DNA富集
2. 精准的靶基因定量分析
3. 专业的数据解读支持

该服务包含完整的实验流程：从MeDIP实验到后续的qPCR验证，一站式解决DNA甲基化研究的验证需求，助力客户发现关键修饰靶点，提升研究成果的可靠性，为发表高分文章提供坚实的数据支撑。

（*其他DNA修饰类型的qPCR验证服务均可提供）

云序生物MeDIP-qPCR服务流程：

1.MeDIP实验：

与MeDIP-seq或cfDNA甲基化测序中的步骤一致，MeDIP实验使用针对甲基化修饰的抗体，通过免疫共沉淀（IP），旨在富集带有甲基化修饰的DNA片段。另外每个样品保留部分未经IP的DNA片段作为Input对照。

MeDIP实验示意图

2.qPCR：

根据选定的基因上预测的甲基化区域设计引物，对每个样品的IP和Input组的DNA进行qPCR。IP和Input信号强度相除得到%（IP/Input），指示该样品中某基因区域的甲基化水平（可以理解为：同一样品中有很多条DNA，某基因的某一区域被修饰的有多少条？）,可用来进行组间的比较。

qPCR实验示意图

3.MeDIP-qPCR结果的计算：

MeDIP-qPCR结果计算公式如下表:

*其中Ct是qPCR得到的循环数，DF是稀释倍数。如最初用于IP和Input的DNA的比例为a：b，则在计算%(IP/Input)值时，需要乘以稀释倍数b/a（经过IP实验得到的DNA量一定少于不做IP实验的Input的DNA量，且qPCR的使用的IP和Input的模板量也不同，因此要在计算的时候将差异倍数考虑进去）。

*注：只有每组设置3个或以上生物学重复时才能计算P值，为了结果的准确性，建议每组至少设置3个生物学重复

样本要求：

样品类型：

细胞、组织、血液或DNA，其他样本类型请电询。

样品量：

1. 细胞：5×10^6
2. 组织：>50mg
3. 血液：全血>2ml（推荐用EDTA抗凝采血管，不可用肝素抗凝管）
4. DNA：3-10μg（浓度：>50ng/µL，无降解，无RNA污染）

样品运输及保存：

样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。

样品保存：组织样品可用PBS冲洗干净后，装入冻存管中，液氮速冻5分钟后，转入-80℃冰箱保存；DNA样品可溶于无菌水中，-80℃保存，避免反复冻融