环状RNA定量PCR服务技术

 

 

技术简介：

 

环状 RNA（circRNA）作为一类具有闭合环状结构的非编码 RNA，其稳定性和组织特异性使其成为疾病诊断和功能研究的重要靶点。然而，由于其与线性RNA共享大部分序列，传统qPCR方法难以特异性区分circRNA，易受同源线性RNA干扰。云序生物环状RNA定量PCR服务基于跨反向剪接位点引物设计与严格实验流程，实现circRNA的高灵敏、高特异性检测，为功能研究与临床转化提供可靠数据支持。

云序生物针对环状 RNA 特异性的 junction 位点，采用了 Outward-facing 引物设计策略，传统线性 RNA引物设计，primer1和 primer2是尾对尾，无法有效扩增；而采用Outward-facing的circRNA 的引物设计，即引物分别位于反向剪接位点两侧，就可以扩增出针对特异性junction 位点的产物，从而特异性的检测环状 RNA。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

线性RNA引物设计（尾对尾）                                                                                     环状RNA引物设计（首尾相连）

 

 

 

 

 

 

云序技术优势：

高特异性 跨反式剪接位点引物+RNase R处理，有效排除线性 RNA 干扰

 

严格质控 从 RNA 提取到数据分析全程标准化，确保实验结果的可重复性

 

技术支持 提供从实验设计到结果解读的技术指导，如引物设计优化

服务流程

1. 样本准备与质量控制 样本类型：RNA、细胞、组织、体液等。 RNA提取：严格实验流程提取总RNA，确保RNA完整性。 结合RNase R处理：消化线性RNA，富集circRNA，减少背景干扰。

 

2. 引物设计与验证 靶点筛选：基于客户提供的circRNA ID或反向剪接位点信息，设计跨位点引物。 阴性对照：同步设计同源线性RNA引物，验证circRNA检测特异性。

 

3. 数据分析 ：提供包含原始数据、熔解曲线、统计分析结果及目标circRNA在不同样本间的相对表达差异的专业报告。

云序用户案例

 

案例分享：云序生物助力世界首篇红斑狼疮性肾炎环状 RNA 研究

原文：Circular Ribonucleic Acid Expression Alteration in Exosomes from the Brain Extracellular Space after Traumatic Brain Injury in Mice

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

文章选取7例LN肾脏组织及6例正常肾脏组织进行环状RNA测序，共鉴定到171个显著性差异表达环状RNA分子。选取10个环状RNA分子进行qPCR验证，7例与测序结果吻合。这其中，CircHLA-C表达与肾病临床指标蛋白尿、血清肌酸酐以及肾组织活动等具有正相关性。疾病组中CircHLA-C表达提高2.72倍，miR-150下降66%。生信预测显示CircHLA-C与miR-150具有结合位点，且二者表达具有负相关性。作者首次证实在红斑狼疮性肾炎中环状RNA——CircHLA-C可能通过海绵机制竞争性结合miR-150，影响疾病发生发展。